方法注解

霉菌和酵母菌测试片

方法编号：5031

1 适用范围：本品可用于各类食品及饮用水中霉菌和酵母菌的计数。

2 方法原理：将霉菌营养培养基、吸水凝胶和酶显色剂加载在纸片上，通过培养，在酶显色剂的放大作用下，使霉菌和酵母菌在纸片上显现出出来，通过计数报告结果。

3方法特点：与传统方法相比，省去了配制培养基、消毒和培养器皿的清洗处理等大量辅助性工作，即开即用，操作简便。培养时间由一周缩短为48h～72h。

4 操作方法

4.1样品处理：无菌称取样品25g（或25mL）放入含有225mL无菌生理盐水的采样瓶或均质杯内，经充分振摇做成1:10的稀释液，用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌水的试管内，用1mL灭菌吸管反复吸吹50次做成1:100的稀释液，以此类推，每个稀释度更换一支灭菌吸管。

4.2接种：

4．2．1一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如食用纯水和矿泉水等）可直接用原液检测。将检验纸片水平放台面上，揭开上面的透明薄膜，用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液1mL，均匀加到中央的滤纸片上，然后轻轻将上盖膜放下，静置5min，每个稀释度接种两片。

4.2．2用手指先沿方格区边缘刮一下，防止水外流，然后再在中间轻轻推刮，使水分在纸片方格区内均匀分布，并将气泡赶走。

4．3培养：将加了样的检验纸片每12片叠放在一起，放入自封袋中，平放在28℃培养箱内培养48h开始观察计数。

4.4结果判断与计数：霉菌和酵母菌在纸片上生长后会显示蓝色斑点，霉菌菌落显示的斑点略大或有点扩散，酵母菌落则较小而圆滑，许多霉菌在培养后期全呈现其本身特有的颜色。选择菌落数适中（10～50个）的纸片进行计数，乘以稀释倍数后即为每克（或毫升）样品中霉菌和酵母菌的数目。

5 计数原则及报告方式：

5.1 通常选择菌落在10～50个之间的纸片进行计数，乘以稀释倍数报告之。

5.2具体计数原则可参照细菌（菌落）总数的测定方法进行。

6 附加说明：由于霉菌常以孢子的形式于空气中到处传播，而多种样品是要求霉菌酵母菌不得捡出，因此检测霉菌时需特别小心操作，取样用品、稀释用水和吸管吸头等都需仔细消毒，接种时尽量避免空气流动，动作要干净利落，每次最好用灭菌生理盐水接一片空白对照，以免出现假阳性结果。

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